Anxa2在乳腺癌细胞侵袭转移中的作用机制及对STAT3信号通路的影响研究

doi:10.3877/cma.j.issn.1674-3946.2021.02.022

目的

探讨膜联蛋白A2(Anxa2)在乳腺癌细胞侵袭转移中的作用机制及对转导因子和转录活化因子(STAT3)信号通路的影响。

方法

乳腺癌细胞株MCF-7作为研究对象，分为对照组和转染组。对照组细胞中加入细胞培养基进行培养；转染组细胞分为两组，均常规构建Anxa2野生型表达载体，一组为未转染组；另一组将其转染到Anxa2降表达的细胞进行拯救，并完成细胞转染，设为转染组；采用细胞划痕试验和Transwell小室完成两组细胞划痕试验、侵袭和迁移试验；采用实时荧光PCR技术测定两组细胞STAT3信号通路水平。采用SPSS18.0软件处理，STAT3信号通路水平、细胞划痕试验采用(±s)表示，三组数据比较采用F检验，P<0.05差异有统计学意义。

结果

转染组细胞24 h Anxa2降表达后细胞划痕距离大于未转染组与对照组(P<0.05)，未转染组与对照组差异无统计学意义(P>0.05)；转染组细胞培养后迁移、侵袭能力均低于对照组与未转染组(P<0.05)；转染组STAT3 mRNA水平明显低于对照组与未转染组(P<0.05)。

结论

Anxa2降表达在乳腺癌细胞中能抑制细胞的侵袭与转移，可能与抑制STAT3信号通路有关，可能成为乳腺癌治疗提供新的靶点。

关键词: 膜联蛋白A2, 乳腺肿瘤, 肿瘤侵润, STAT3转录因子, STAT3信号通路

Objective

To investigate the role of annexin A2 (anxa2) in mediating invasion and metastasis of breast cancer cells through the signal pathway of transducer and activator of transcription (STAT3).

Methods

Breast cancer cell line MCF-7 was divided into control group and transfection group. The cells in the control group were cultured in the cell culture medium; the cells in the transfection group were divided into two groups, while the wild-type expression vector of anxa2 was routinely constructed, one group was the non-transfection group; the other group was transfected into the cells with decreased expression of anxa2 for rescue, and completed the cell transfection, which was set as the transfection group; the cell scratch test and Transwell chamber were used to complete the two groups of cell scratch test, invasion and migration test The level of STAT3 signaling pathway was measured by real-time PCR. Statistical analysis were performed by using SPSS18.0 software. STAT3 signal pathway level and cell scratch test were expressed as. The data of three groups were analyzed by using F test. A P value of <0.05 was considered as statistically significant difference.

Results

The scratch distance of transfection group was much longer than that of non-transfection group and control group (P<0.05), however without significant difference between non-transfection group and control group (P>0.05); the migration and invasion ability of transfected cells were lower than those of control group and non-transfection group respectively (P<0.05); STAT3 mRNA level of transfected group was lower than those of control group and non-transfection group (P<0.05).

Conclusion

Down regulated expression of anxa2 could inhibit the invasion and metastasis of breast cancer cells, relating to the inhibition of STAT3 signaling pathway, which may provide a new target for the treatment of breast cancer.

Key words: Annexin A2, Breast neoplasms, Neoplasm invasiveness, STAT3 transcription factor, STAT3 signaling pathway

表1 STAT3基因引物设计

基因类型	引物设计	长度
STAT3	Forward: 5′-TGGTGGGCCGCAGAACATGTGC-3′	25
STAT3	Reverse: 5′-GCGAGCACAGAATTAATACGAC-3′	25
β-actin	Forward: 5′-CTTAGTTGCGTTACACCCTTTCTTG-3′	20
β-actin	Reverse: 5′-CTGTCACCTTCACCCGTTCCAGTTT-3	20

表1 STAT3基因引物设计

基因类型	引物设计	长度
STAT3	Forward: 5′-TGGTGGGCCGCAGAACATGTGC-3′	25
STAT3	Reverse: 5′-GCGAGCACAGAATTAATACGAC-3′	25
β-actin	Forward: 5′-CTTAGTTGCGTTACACCCTTTCTTG-3′	20
β-actin	Reverse: 5′-CTGTCACCTTCACCCGTTCCAGTTT-3	20

图1 乳腺癌细胞株MCF-7对照组、未转染组及转染组细胞划痕结果比较

图2 乳腺癌细胞株MCF-7对照组、未转染组及转染组细胞迁移、侵袭结晶紫色染色比较[注：A图、D图为对照组迁移、侵袭结晶紫染色结果；B图、E图为未转染组迁移、侵袭结晶紫染色结果；C图、F图为转染组迁移、侵袭结晶紫染色结果。]

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