结直肠癌患者腹腔镜根治术前后肠道菌群的变化研究

doi:10.3877/cma.j.issn.1674-3946.2018.06.011

目的

研究结直肠癌患者腹腔镜根治术前后肠道菌群的变化。

方法

选择2016年6月到2017年12月收治的结直肠癌患者46例作为结直肠癌组，选择同期健康体检者46例为健康体检组。纳入患者均行腹腔镜根治术，在术前、术后分别采集一次新鲜粪便，测定采集粪便中肠道菌群DNA情况，采用聚合酶链式反应－变性梯度凝胶电泳测定患者手术前、后肠道菌群情况，根据测定结果绘制相应的图谱，分析手术前、后肠道菌群的变化情况。采用SPSS18.0软件处理，肠道菌群的多样性及丰富度采用(±s)表示，采用配对t检验或F检验，P<0.05差异有统计学意义。

结果

对粪便进行PCR扩增，获得的肠道菌群各带均处于200 bP左右，与预期的DNA片段长度相吻合；健康体检者粪便标本多样性指数(H)为(5.6±0.2)，丰富度(E)为(77.1±0.4)条；结直肠癌患者术前粪便标本多样性指数(H)为(3.8±0.1)、术后为(4.1±0.1)，术前丰富度(E)为(45.3±0.9)条、术后为(50.6±0.6)条，术后肠道菌群多样性及丰富度比术前增加(P<0.05)，但仍低于健康体检组(P<0.05)。肠道菌群的多样性及丰富度与患者的年龄、临床分期有关(P<0.05)，与性别、病程、肿瘤类型无关(P>0.05)。

结论

正常人肠道菌群的多样性及丰富度较结直肠癌患者高，其与患者的年龄、临床分期有关。临床通过肠道菌群变化分析有助于指导临床治疗。

关键词: 结直肠肿瘤, 腹腔镜检查, 肠杆菌科, 变性梯度凝胶电泳

Objective

To investigate perioperative changes in intestinal flora of patients underwent laparoscopic colorectal cancer surgery.

Methods

From June 2016 to December 2017, 46 patients with colorectal cancers were divided into colorectal cancer group, and 46 healthy persons were divided into health examination group. All of 46 patients with colorectal cancers underwent laparoscopic radical surgery. Before and after operation, fresh feces were collected and the DNA of intestinal flora was measured. The intestinal flora was determined by polymerase chain reaction-denaturing gradient gel electrophoresis. Drawing the corresponding map based on the results of the determination. The perioperative changes in intestinal flora were analyzed by using SPSS18.0 software. The diversity and richness of intestinal flora were expressed as (±s), and were examined by using paired t test or F test. A P value<0.05 was considered as statistically significant difference.

Results

PCR amplification of feces showed that the bands of intestinal microflora were about 200 BP, which coincided with the expected length of DNA fragment. The fecal diversity index was (5.6±0.2) and the richness (E) was (77.1±0.4) in healthy people. Preoperative fecal specimen diversity index (H) was (3.8±0.1), and (4.1±0.1) after operation in colorectal cancer patients. The preoperative abundance (E) was (45.3±0.9), and (50.6+ 0.6) after operation. The diversity and richness of intestinal microflora after operation were higher than those before operation (P<0.05), however it was still lower than those in the healthy group (P<0.05). The diversity and richness of intestinal flora were related to the age and clinical stage of patients (P<0.05), however not related to sex, course of disease and tumor type (P>0.05).

Conclusion

The diversity and richness of intestinal flora in normal people are higher than those in patients with colorectal cancer, which is related to the age and clinical stage of patients. Clinical analysis of intestinal flora is helpfμl to guide clinical treatment.

Key words: Colorectal Neoplasms, Laparoscopy, Enterobacteriaceae, Denaturing Gradient Gel Electrophoresis

图1 健康体检粪便标本DNA的PCR扩增情况(200 bP左右)

图2 7例结直肠癌患者术前、术后粪便标本DNA的PCR扩增情况(200 bP左右)注：其中1～7为7例患者术前粪便标本DNA的PCR扩增情况，8～14为此7例患者术后粪便标本DNA的PCR扩增情况。

表1 46例结直肠癌患者与健康体检人群肠道菌群水平比较(±s)

组别	?	例数	多样性(H)	丰富度(E)
健康体检组	?	46	5.6±0.2	77.1±0.4
结直肠癌组	术前	46	3.8±0.1	45.3±0.5
?	术后	46	4.1±0.1	50.6±0.6
F值	?	?	5.64	4.53
P值	?	?	0.02	0.04

表1 46例结直肠癌患者与健康体检人群肠道菌群水平比较(±s)

组别	?	例数	多样性(H)	丰富度(E)
健康体检组	?	46	5.6±0.2	77.1±0.4
结直肠癌组	术前	46	3.8±0.1	45.3±0.5
?	术后	46	4.1±0.1	50.6±0.6
F值	?	?	5.64	4.53
P值	?	?	0.02	0.04

图3 7例结直肠癌患者术前、术后粪便标本DGCE图谱变化[注：编号15～21为直肠癌患者术前粪便标本DGCE图谱，22～28为直肠癌患者术后粪便标本DGCE图谱。直肠癌患者术后各泳道带条数目较术前略有增加，带条亮化程度减弱。]

表2 46例结直肠癌患者术前肠道菌群水平与病理特征关系(±s)

类别(例)		多样性(H)	丰富度(E)	t/F	P
性别		?	?	?	?
?	男(26)	3.8±0.1	45.2±0.6	T_H＝1.994	P_E＝0.056
?	女(20)	3.7±0.2	45.4±0.5	T_E＝1.176	P_E＝0.291
年龄		?	?	?	?
?	≥60岁(22)	3.6±0.1	45.1±0.5	T_H＝2.994	P_E＝0.007
?	<60岁(24)	3.8±0.1	45.5±0.5	T_E＝3.973	P_E＝0.000
病程		?	?	?	?
?	≥10月(23)	3.8±0.1	45.3±0.5	T_H＝1.586	P_E＝0.129
?	<10月(23)	3.9±0.1	45.4±0.5	T_E＝1.649	P_E＝0.301
肿瘤类型		?	?	?	?
?	乳头状腺癌(23)	3.8±0.1	45.3±0.6	F_H＝2.994	P_E＝0.139
?	管状腺癌(12)	3.7±0.1	45.2±0.5	F_E＝3.068	P_E＝0.106
?	粘液腺癌(11)	3.7±0.1	45.3±0.5	?	?
TNM分期		?	?	?	?
?	Ⅱ期(24)	3.7±0.1	45.5±0.5	T_H＝2.556	P_E＝0.019
?	Ⅲ期(22)	3.9±0.1	45.1±0.4	T_E＝2.649	P_E＝0.011

表2 46例结直肠癌患者术前肠道菌群水平与病理特征关系(±s)

类别(例)		多样性(H)	丰富度(E)	t/F	P
性别		?	?	?	?
?	男(26)	3.8±0.1	45.2±0.6	T_H＝1.994	P_E＝0.056
?	女(20)	3.7±0.2	45.4±0.5	T_E＝1.176	P_E＝0.291
年龄		?	?	?	?
?	≥60岁(22)	3.6±0.1	45.1±0.5	T_H＝2.994	P_E＝0.007
?	<60岁(24)	3.8±0.1	45.5±0.5	T_E＝3.973	P_E＝0.000
病程		?	?	?	?
?	≥10月(23)	3.8±0.1	45.3±0.5	T_H＝1.586	P_E＝0.129
?	<10月(23)	3.9±0.1	45.4±0.5	T_E＝1.649	P_E＝0.301
肿瘤类型		?	?	?	?
?	乳头状腺癌(23)	3.8±0.1	45.3±0.6	F_H＝2.994	P_E＝0.139
?	管状腺癌(12)	3.7±0.1	45.2±0.5	F_E＝3.068	P_E＝0.106
?	粘液腺癌(11)	3.7±0.1	45.3±0.5	?	?
TNM分期		?	?	?	?
?	Ⅱ期(24)	3.7±0.1	45.5±0.5	T_H＝2.556	P_E＝0.019
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Perioperative changes in intestinal flora of patients underwent laparoscopic colorectal cancer surgery

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